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                    當(dāng)前位置:首頁(yè)  >  技術(shù)文章  >  注意這個(gè)關(guān)鍵點(diǎn),支原體檢測(cè)更準(zhǔn)確

                    注意這個(gè)關(guān)鍵點(diǎn),支原體檢測(cè)更準(zhǔn)確

                    更新時(shí)間:2022-08-22  |  點(diǎn)擊率:591

                    通常,如果懷疑細(xì)胞有支原體污染,可直接取細(xì)胞上清進(jìn)行支原體PCR檢測(cè)。因?yàn)榇嬖谥гw污染的細(xì)胞上清中,支原體密度為通常為10^6-10^8個(gè)/ml,已足以用于PCR檢測(cè)。

                    Minverva公司生產(chǎn)的支原體PCR試劑盒靈敏度高,特異性好,檢測(cè)的支原體種類多,很受用戶的歡迎。

                    但有時(shí),支原體檢測(cè)前,還需對(duì)樣品中的支原體DNA進(jìn)行提取。那么,什么時(shí)候需要提取呢?

                    支原體提取與支原體檢測(cè)

                    當(dāng)出現(xiàn)以下幾種情況時(shí),建議大家在進(jìn)行支原體qPCR前,先進(jìn)行提取支原體提取。

                    1、細(xì)胞培養(yǎng)液中存在抑制PCR的物質(zhì),這時(shí)就需要提取。細(xì)胞培養(yǎng)基中的血清濃度如果超過(guò)12%,那么對(duì)下游的PCR反應(yīng)會(huì)產(chǎn)生抑制。酚紅,對(duì)熒光定量PCR的檢測(cè)也會(huì)干擾。這些均可以通過(guò)使用Miverva公司的支原體DNA提取試劑盒來(lái)克服。

                    2、對(duì)于樣品類型是細(xì)胞團(tuán)、疫苗、凍存細(xì)胞和石蠟包埋的組織,也需要提前提取DNA。

                    3、另外,如果樣品中蛋白含量高于10mg/ml,則先需要用蛋白酶K進(jìn)行處理。

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                    該試劑盒可從細(xì)胞上清和生物制品中分離支原體DNA,全程只需30分鐘。該試劑盒符合歐洲藥典規(guī)范。

                    分四步組成:

                    • 細(xì)胞溶解

                    • DNA特異性與層析柱結(jié)合

                    • 祛除殘留的污染物和抑制劑

                    • 洗脫DNA。

                    需要注意的是,常規(guī)細(xì)菌和哺乳動(dòng)物細(xì)胞的DNA提取試劑盒是否能用于支原體DNA提取,值得懷疑。因?yàn)槿绻继崛〕鰜?lái),則會(huì)對(duì)下游PCR檢測(cè)帶來(lái)干擾。總之,提取后的DNA應(yīng)具有一定的純度和產(chǎn)率。


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