在生物醫(yī)學和細胞生物學研究中，細胞培養(yǎng)是一項基礎(chǔ)而核心的技術(shù)。它不僅為科學家提供了觀察和研究細胞行為、生理、病理過程的平臺，還是藥物研發(fā)、基因治療等領(lǐng)域重要的實驗手段。完整的細胞培養(yǎng)全流程涉及多個精心設(shè)計的步驟，其中，胎牛血清（Fetal Bovine Serum, FBS）作為培養(yǎng)基的關(guān)鍵成分，其選擇和使用對細胞培養(yǎng)的成功至關(guān)重要。

一、完整的細胞培養(yǎng)全流程

1、準備階段：

設(shè)備清洗與消毒：確保所有用于細胞培養(yǎng)的器具（如培養(yǎng)皿、移液管、離心管等）干凈無菌，常通過高壓蒸汽滅菌或紫外線照射等方法進行消毒。

培養(yǎng)基配制：根據(jù)細胞類型和培養(yǎng)需求，選擇合適的培養(yǎng)基并加入必要的生長因子、抗生素等添加劑，最后按比例加入胎牛血清。

2、細胞復(fù)蘇（對于一開始培養(yǎng)或需要繼續(xù)培養(yǎng)的凍存細胞）：

將凍存的細胞從液氮或超低溫冰箱中取出，迅速置于37℃水浴中解凍。

解凍后的細胞懸液加入含有預(yù)熱培養(yǎng)基的離心管中，輕輕混勻后離心去除凍存液。

用新鮮培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到培養(yǎng)皿中。

3、細胞培養(yǎng)：

將接種好的細胞置于適宜條件（如溫度、濕度、CO?濃度）的細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

定期檢查細胞生長情況，包括細胞形態(tài)、密度和培養(yǎng)基顏色等，必要時進行換液或傳代。

、4細胞傳代：

當細胞生長至鋪滿培養(yǎng)皿底部約80%-90%時，進行傳代操作。

移除舊培養(yǎng)基，用無菌PBS清洗細胞表面。

加入適量的消化液（如胰蛋白酶），在適宜條件下消化細胞。

消化完成后，加入含血清的培養(yǎng)基終止消化，并輕輕吹打使細胞脫壁形成懸液。

將細胞懸液分裝到新的培養(yǎng)皿中繼續(xù)培養(yǎng)。

5、細胞凍存：

對于暫時不需要培養(yǎng)或需長期保存的細胞，可進行凍存處理。

使用含有DMSO等冷凍保護劑的凍存液重懸細胞，并分裝到凍存管中。

按照一定的降溫程序（如4℃、-20℃、-80℃梯度降溫）將細胞凍存管轉(zhuǎn)移至液氮罐中長期保存。

二、對胎牛血清的要求

胎牛血清是細胞培養(yǎng)中常用的天然培養(yǎng)基添加劑之一，它含有多種生長因子、激素、維生素和其他營養(yǎng)物質(zhì)，對細胞的生長和分化起著至關(guān)重要的作用。然而，不同來源、批次和加工方式的胎牛血清在質(zhì)量上可能存在差異，因此在使用過程中需要滿足以下要求：

無菌性：胎牛血清必須是無菌的，以避免引入微生物污染導(dǎo)致細胞培養(yǎng)失敗。

內(nèi)毒素含量低：內(nèi)毒素是細菌死亡后釋放的有毒物質(zhì)，對細胞具有毒性作用。因此，要求胎牛血清中的內(nèi)毒素含量必須控制在極低水平。

營養(yǎng)豐富且穩(wěn)定：胎牛血清應(yīng)含有豐富且穩(wěn)定的生長因子和其他營養(yǎng)物質(zhì)，以支持細胞的正常生長和增殖。同時，不同批次之間的質(zhì)量差異應(yīng)盡可能小。

無外源因子污染：包括病毒、支原體等外源因子的污染會對細胞培養(yǎng)產(chǎn)生嚴重影響。因此，胎牛血清必須通過嚴格的檢測和篩選程序來確保其無外源因子污染。

適合細胞類型：不同細胞類型對營養(yǎng)物質(zhì)的需求可能不同。因此，在選擇胎牛血清時需要考慮細胞類型的特異性需求，并選擇與細胞類型相匹配的血清。

Ausbian進口胎牛血清，內(nèi)毒素含量低，≤3EU/ml，通過各項無菌檢測；多批次平行供應(yīng)，滿足各種實驗需求。